什麼載體必須做與基因和克隆
在分子克隆中,載體是用作將外源基因轉移或插入另一個細胞中的載體的DNA分子,其可以在其中復制和/或表達。 載體是基因克隆的基本工具之一,如果它們也編碼某種編碼生物指示劑分子的標記基因,這些基因可以在生物評估中測量以確保它們在宿主生物體中的插入和表達,則它們是最有用的。
具體而言,克隆載體是從病毒,質粒或高等生物體細胞中提取的DNA,插入外源DNA片段用於克隆目的。 由於克隆載體可以穩定地保持在生物體中,所以載體還包含允許方便插入或去除DNA的特徵。 克隆到克隆載體中後,可將DNA片段進一步亞克隆到另一個可以更特異性使用的載體中。
在某些情況下,病毒被用來感染細菌。 這些病毒簡稱為噬菌體或噬菌體。 逆轉錄病毒是將基因導入動物細胞的優良載體。 質粒是DNA的圓形片段,是用於將外源DNA導入細菌細胞的最常用載體。 它們通常攜帶抗生素抗性基因,可用於測試質粒DNA在抗生素培養皿上的表達。
通常使用土壤細菌根癌土壤桿菌( Agrobacterium tumefaciens)進行基因轉移進入植物細胞,所述土壤根瘤土壤桿菌作為載體並將大質粒插入宿主細胞中。 只有含有克隆載體的細胞在存在抗生素時才會生長。
克隆載體的主要類型
六種主要類型的載體是:
- 質粒。 在細菌細胞內自主複製的環狀染色體外DNA。 質粒通常具有高拷貝數,如pUC19,其拷貝數為每個細胞500-700個拷貝。
- 噬菌體。 線性DNA分子來源於噬菌體λ。 可以用外源DNA取代而不會中斷其生命週期。
- 粘粒。 另一種結合質粒和噬菌體特徵的環狀染色體外DNA分子。
- 細菌人工染色體。 基於細菌微型F質粒。
- 酵母人工染色體。 這是一種人造染色體,它含有復制起點,酵母著絲粒(連接姊妹染色單體或二聯體的染色體的一部分)和選擇性標記的端粒(在細胞分裂過程中被切斷的染色體末端的一次性緩衝液)用於在酵母細胞中鑑定。
人類人造染色體。 這種類型的矢量是 潛在地用於基因遞送到人類細胞中,以及用於表達研究和確定人類染色體功能的工具。 它可以攜帶非常大的DNA片段。
所有工程載體都有復制起點(複製子),克隆位點(位於插入外源DNA既不會破壞重要標記的複製或失活),也包含選擇性標記(通常是提供對抗生素的抗性的基因)。