該緩衝液用於DNA的電泳分離
TBE緩衝液對於分離較小的DNA片段(MW <1000)特別有用,例如限制酶消化的小產物。
TBE具有更大的緩衝能力,並且會比TAE緩衝區提供更清晰的分辨率。 TAE緩衝液是由Tris鹼,乙酸和EDTA(Tris-acetate-EDTA)組成的溶液。
TBE通常比TAE更昂貴並且抑制DNA連接酶,如果想要進行隨後的DNA純化和連接步驟,這可能會導致問題。 通過以下三個簡單步驟,了解如何製作TBE緩衝區。 創建此緩衝區不應超過約30分鐘。 就是這樣:
準備EDTA儲液
應提前準備EDTA(乙二胺四乙酸)溶液。 在pH調節到約8.0之前,EDTA不會完全溶解到溶液中。 對於500毫升0.5M EDTA的儲備溶液,稱量93.05克EDTA二鈉鹽(FW = 372.2)。 然後將其溶於400毫升去離子水中並用NaOH調節pH值。 之後,將解決方案加到最終量為500毫升。
準備TBE的庫存解決方案
通過稱量54g Tris鹼(FW = 121.14)和27.5g硼酸(FW = 61.83)製備TBE的濃縮(5x)儲備溶液並將其溶解在大約900mL去離子水中。 然後加入20毫升0.5M EDTA(pH8.0)並將溶液調節至最終體積1升。
該溶液可以在室溫下儲存,但在較老的溶液中會形成沉澱。 將緩衝液保存在玻璃瓶中,如果沉澱物已經形成,則丟棄。
準備TBE的工作解決方案
對於瓊脂糖凝膠電泳,可以以0.5x的濃度(濃縮物的1:10稀釋)使用TBE緩衝液。 在去離子水中將原液稀釋10倍。 最終溶質濃度是45mM Tris-硼酸鹽和1mM EDTA。 緩衝液現在可用於運行瓊脂糖凝膠 。
你需要什麼
為了製造TBE緩衝液,您只需要四種物質。 這個清單上的其餘項目是設備。 所需的四種物質是EDTA二鈉鹽,Tris鹼,硼酸和去離子水。
至於設備,您需要適當的pH計和校準標準。 除此之外,你需要600毫升和1500毫升燒杯或燒瓶。 四捨五入您的設備需求是量筒,攪拌棒和攪拌盤。
檢查您將要使用的實驗室的清單,以確保您在開始之前擁有所需的一切。 沒有什麼比在準備解決方案的過程中不得不停下來更糟了,因為你已經用完了適當的材料。
如果您的實驗室在學校或工作場所,請與適當的人員核對,以確定他們擁有庫存中的所有物品。 這樣做可能會最終為您節省時間和精力。